Autor: JUAN MANUEL ALVARADO OROZCO

Publicado el

Diseño de la celda de microfluídica

En esta sección, el objetivo es desarrollar una celda de prueba que permita mediante microfluídica transportar diferentes reactivos a través de la cámara de inmunoensayo en la cual se encuentra alojado el sensor (QCM). Esta celda de pruebas inmunológicas ha sido previamente diseñada mediante software tipo CAD, y posteriormente fabricada mediante impresión 3D usando la técnica de estereolitografía (SLA).

La celda de inmunoensayo ha sido especialmente diseñada para cumplir varios propósitos. El primero es el de alojar y fijar en su interior el sensor (QCM) previamente funcionalizado e inmovilizado, procurando que este no sufra perturbaciones relacionadas con su resonancia durante los procesos de medición. Por otro lado, la celda permite la incorporación de los reactivos estipulados en el protocolo de inmunoensayo, y finalmente, mantiene el contacto eléctrico constante del sensor a una etapa de oscilación y ReadOut (adquisición de señal).

Estanqueidad en celda de prueba proyecto Biosensor COVID-19
Celda inmunoensayo en celda de prueba proyecto Biosensor COVID-19
Impresión de MA con tecnología de Estereolitografía – SLA por sus siglas en inglés Stereolithography
No hay comentarios que mostrar.

Volver

Se ha enviado tu mensaje

juan.alvarado@cidesi.edu.mx – david.fernandez@cidesi.edu.mx
442 211 9800 ext. 5370

Publicado el

Importancia de hacer test

En esta nota se destacan dos puntos relevantes: 1. ¿Cómo funcionan los test? 2. Para qué sirven los test de diagnóstico del coronavirus, haciendo mención sobre la sensibilidad, especificidad, falsos positivos, falsos negativos.

El director general de la Organización Mundial de la Salud Tedros Adhanom Ghebreyesus insiste en que la forma “más efectiva” de salvar vidas es “romper las cadenas de transmisión” haciendo test y aislando.

Durante una infección, el virus se multiplica activamente. Cuando comienza, el virus se puede detectar en muestras biológicas (frotis faríngeo o nasofaríngeo, aspirado traqueal o lavado broncoalveolar). Primero hay un período de latencia en el que todavía no es posible detectar la respuesta de tu sistema inmune. Pero después de unos días, comienzas a producir anticuerpos. Se producen primero anticuerpos del tipo IgM hasta alcanzar un máximo a los 7-10 días para, más tarde, casi desaparecer. Esta respuesta primaria es indicativa de una infección aguda. Posteriormente se producirá la respuesta inmune secundaria, más rápida, intensa y prolongada. Se producirán anticuerpos de tipo IgG y durarán más tiempo en la sangre. Además, a nivel de las secreciones mucosas, como las respiratorias, juega un papel predominante la IgA.

Fuente original:

https://microbioun.blogspot.com/2020/04/test-diagnostico-coronavirus.html?m=1

No te pierdas ningún detalle, suscríbete

Queremos escucharte, deja tus comentarios

Volver

Se ha enviado tu mensaje

Publicado el

Clonación, expresión y purificación del dominio de la proteína S1

Te contamos un poco más de los primeros planes del proyecto:

En esta etapa, se buscará clonar, expresar y caracterizar el dominio S1 de la proteína espiga S, una vez obtenido esos resultados se establecerán condiciones para la obtención de la proteína S.

Se busca estandarizar el ensayo de ELISA para la detección de anticuerpos en pacientes que sufren COVID-19. ELISA es el acrónimo en inglés para enzimoinmunoanálisis de adsorción, es un ensayo de laboratorio comúnmente usado para detectar diferentes anticuerpos en la sangre sabemos por la literatura que un anticuerpo es una proteína que genera el sistema inmunitario del cuerpo humano que produce cuando identifica sustancias dañinas conocidas como antígenos.

El diagnóstico para COVID-19 se realizará a través de la detección de anticuerpos IgM/IgG específicos contra la espiga S (aa7187-aa8461) y su dominio unión al receptor RBD (aa7537-aa7707). De manera general, este proyecto inicia con el diseño y clonación del dominio S1 y RBD ambos de la proteína de espina del coronavirus SARS-CoV-2 en el vector de expresión pcDNATM4/HisMax. Los plásmidos resultantes, se usarán para transfectar a las células HEK 293T con ambas construcciones pcDNATM4/HisMax/SI y pcDNATM4/HisMax/RBD de manera transitoria para analizar, caracterizar e identificar a cada proteína. Una vez que se tengan estos resultados, se volverán a transfectar, las células para iniciar el proceso de selección de las células transfectadas establemente. Se determinará el tiempo óptimo de la máxima expresión de las proteínas.


La proteína S1 y la RBD se cosecharan de los sobrenadantes de las células en cultivo, se procederá con la caracterización de estas. Finalmente, se producirá el abasto suficiente de las proteínas S1 y RBD que permitan optimizar las condiciones de ELISA indirecta en placa y posteriormente evaluar la respuesta de anticuerpos de clase IgM y IgG.

Con estos datos es posible tener una referencia en función a la especificidad y sensibilidad de los inmunoreactivos obtenidos para la detección de COVID-19 a través de la proteína S1.

juan.alvarado@cidesi.edu.mx – david.fernandez@cidesi.edu.mx

No te pierdas ningún detalle del proyecto, suscríbete

Queremos escucharte, no olvides dejar tus comentarios

Volver

Se ha enviado tu mensaje

También te puede interesar:

Publicado el

Caracterización y acondicionamiento de microbalanzas de cuarzo.

Los transductores piezoeléctricos como lo son las balanzas de cuarzo, son inicialmente sometidos a un proceso de caracterización con el objetivo de determinar las condiciones de trabajo en resonancia, manteniendo las menores pérdidas dieléctricas en el sensor.

Lo anterior, se realiza a partir de espectroscopía de impedancia  a continuación se listan la las magnitudes y constantes tanto piezoeléctricas como dieléctricas de interés:

  1. Capacitancia (C)
  2. Permitividad (e)
  3. Pérdidas dieléctricas (Tan d)
  4. Frecuencia de resonancia (fr y fa)
  5. Factor de calidad mecánico (Qm)
  6. Constante acoplamiento electromecánico (kt)
  7. Conductancia (G)

Usualmente la frecuencia de resonancia que se determina como frecuencia de trabajo, es aquella que ocurre en la zona inductiva del sensor, cuando este experimenta un nivel máximo de conductancia (G). Es importante mencionar que la frecuencia de trabajo puede ajustarse también, teniendo en cuenta los armónicos del sensor y posibles defectos en la geometría del mismo.

Inmovilización y funcionalización de la proteína S

No te pierdas ningún avance del proyecto, suscríbete:

Te queremos escuchar, no olvides dejar tus comentarios:

Volver

Se ha enviado tu mensaje

juan.alvarado@cidesi.edu.mx – david.fernandez@cidesi.edu.mx

También te puede interesar

Publicado el

Protocolo de inmovilización y funcionalización covalente de la proteína S.

El procedimiento de inmovilización del material biológico a utilizar como bioreceptor en la superficie de las microbalanzas de cuarzo (QCM) se logra a través de procedimientos de funcionalización. 

La funcionalización consiste en modificar las condiciones superficiales del electrodo de oro, previamente depositado en las QCM’s. Esto se logra mediante el crecimiento de una capa autoensamblada mixta conformada a partir de cadenas tioladas, las cuales funcionan como componente de enlace entre el sensor y los bioreceptores a ser inmovilizados.

Seguido a esto, se procede a inmovilizar los bioreceptores encargados de atrapar a los anticuerpos presentes o no, en las muestras serológicas de los pacientes a diagnosticar. 

Protocolo de funcionalización e inmovilización
Reacción inmunológica
No hay comentarios que mostrar.

Volver

Se ha enviado tu mensaje

juan.alvarado@cidesi.edu.mx – david.fernandez@cidesi.edu.mx